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T细胞斑点试验(T SPOT

分享到: 本站编辑:admin 日期: 2010-08-05 22:48 点击:

【中文摘要】:

【中文摘要】结核病(Tuberculosis,TB)被称为“白色瘟疫”,已经演变为全球性公共卫生问题,而结核性脑膜炎(Tuberculous Meningitis,TBM)在结核病中的发病率为10%-20%,是最常见、最严重的肺外结核病,死亡率为15%-30%,致残率和致死率高。其预后与早期诊断从而早期治疗有密切关系。但由于结核性脑膜炎早期临床表现及脑脊液改变特异性差,与病毒性脑膜炎、化脓性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎等疾病较难鉴别,目前国内外尚缺乏理想的早期诊断方法。结核性脑膜炎常用的实验室诊断方法主要有脑脊液细菌培养、脑脊液抗酸染色、脑脊液常规生化、结核抗体检测、PPD试验等,结核性脑膜炎确诊的金指标为脑脊液培养结核菌生长或脑脊液抗酸染色找到结核杆菌,但上述检测方法特异性和灵敏性尚不令人满意,给结核性脑膜炎的早期诊断带来了困难。T细胞斑点试验(T SPOT-TB)则是利用酶联免疫斑点法(ELISPOT法)探测结核感染者的特异性T细胞来诊断结核的一种新方法,该方法源于Mahairas等在1996年发现的一段存在于致病性结核分枝杆菌中名为“RD1”的基因序列,而在卡介苗菌株和大部分环境中的分枝杆菌基因中则缺乏RD1序列。RD1编码产生的ESAT-6和CFP-10(culture filtrate protein)作为特异性抗原刺激机体T淋巴细胞产生特异性的细胞因子IFN-γ。根据这一原理,T SPOT-TB试验是利用结核杆菌感染者外周血单核细胞(PBMC)中存在结核感染特异性T细胞,这些T细胞在受到致病性结核杆菌特异抗原刺激后分泌IFN-γ而设计的T细胞免疫斑点试验。酶联免疫斑点法(ELISPOT法)检测特异性淋巴细胞筛查结核患者现已应用于欧美各国临床诊断中,而在国内仅处于试验性诊断阶段。众所周知,结核性脑膜炎的免疫学反应与肺结核等颅外结核感染并无二致,故推测该方法亦可用于结核性脑膜炎的早期诊断。目的:应用结核感染T细胞斑点试验(T SPOT-TB)检测血液中IFN-γ分泌T细胞,探讨此方法对早期结核性脑膜炎的诊断意义。方法:选择2007年10月至2009年4月在南昌大学第一附属医院感染科收治的30例发病<14天的结核性脑膜炎患者,以及同期收治的15例非结核颅内感染患者(包括病毒性脑膜炎5例、化脓性脑膜炎5例、新型隐球菌脑膜炎5例)。分别取抗凝全血8ml,分离提取单个核细胞,应用ELISPOT法检测血液中IFN-γ分泌T细胞,实验结果与ELISA法检测脑脊液结核抗体结果、脑脊液抗酸染色结果、脑脊液细菌培养结果、PPD试验结果进行比较。结果:1. ELISPOT法检测血液中IFN-γ分泌细胞:结核性脑膜炎组患者共30例,阳性27例,阴性3例,阳性率90%。非结核颅内感染组患者共15例,阳性2例,阴性13例,阳性率13.3%。2.ELISA法检测脑脊液结核抗体:结核性脑膜炎组患者共30例,阳性5例,阴性25例,阳性率16.7%,非结核颅内感染组患者共15例,阳性为2例,阳性率13.3%。3.脑脊液抗酸染色:结核性脑膜炎组患者共30例,阳性4例,阴性26例,阳性率13.3%,非结核颅内感染组患者共15例,阳性为0例。4.脑脊液细菌培养:结核性脑膜炎组患者共30例,阳性0例,非结核颅内感染组患者共15例,阳性为1例,阳性率0.6%。5. PPD试验:结核性脑膜炎组患者共30例,阳性16例,阴性14例,阳性率53.3%,非结核颅内感染组患者共15例,阳性为6例,阳性率40%。ELISPOT法检测血液中IFN-γ分泌T细胞(T spot-TB)敏感性高于ELISA法检测脑脊液结核抗体、脑脊液抗酸染色、脑脊液细菌培养、PPD试验,具有高度敏感性,且通过与非结核颅内感染组的对比,证实其有高度特异性。结论:T细胞斑点试验(T SPOT-TB),即ELISPOT法检测血液中IFN-γ分泌细胞,是一种有效的结核性脑膜炎早期诊断的辅助检查方法。

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